Empfehlung für den Umgang mit Zellkulturen bei gentechnischen Arbeiten
Die Zentrale Kommission für Biologische Sicherheit (ZKBS) schließt die Möglichkeit einer verbreiteten Kontamination von Zelllinien mit SMRV nicht aus. Sie empfiehlt daher, Zelllinien, die bei gentechnischen Arbeiten verwendet werden, auf SMRV zu prüfen. Kontaminierte und nicht untersuchte Zelllinien sollten inaktiviert werden oder unter Sicherheitsmaßnahmen der Stufe 2 gehalten werden. Außerdem weist die ZKBS darauf hin, dass eine Komplementierung rekombinanter replikationsdefekter Retroviren in Zelllinien, die mit SMRV kontaminiert sind, nicht ausgeschlossen werden kann. Auch Tiere, auf die Zellen oder deren Überstände übertragen wurden, sind möglicherweise mit SMRV infiziert und sollten ebenso überprüft oder unter Sicherheitsmaßnahmen der Stufe 2 gehalten werden.

Stellungnahme der ZKBS zur Kontamination von Zelllinien mit dem Squirrel Monkey Retrovirus

Am Institut für Virologie der Tierärztlichen Hochschule wird die PCR zum Nachweis der SMRV-spezifischen Sequenzen nach Empfehlung des Unterausschusses Methodenentwicklung (UAM) durchgeführt.

Benötigtes Probenmaterial:

1 x 10⁶ eukaryotische Zellen  in 200 µl PBS  (gekühlt versenden!)

• Zellen abtrypsinieren.
• Zellen zählen.
• 1 x 10⁶ Zellen in ein 1,5 ml Reaktionsgefäß überführen.
• Zentrifugieren: 5 min bei 400g.
• Überstand abnehmen und verwerfen.
• Zellen in 200 µl PBS  resuspendieren, Reaktionsgefäß sicher verschließen und sofort versenden (zwischendurch nicht einfrieren!!)

• es werden jeweils zwei PCR-Reaktionen durchgeführt (env- und gag-Gene)

1. Zelllinie

jede weitere